ИФА-анализ – что это такое? Описание и расшифровка результатов

Иммуноферментный анализ крови с расшифровкой показателей

Иммунная и ферментативная реакции

Как явственно следует из названия, анализ крови ИФА включает в себя несколько составляющих, а именно – иммунную и ферментативную реакции.
Иммунная реакция позволяет связать клеточные элементы и болезнетворные микроорганизмы, а ферментативная дает возможность визуализировать и оценить результат предыдущей реакции.

Рассмотрим каждую реакцию более подробно.

Что такое иммунные реакции?

Иммунными называются специфические реакции, позволяющие связать антиген с антителом и создать иммунный комплекс. Что же это значит? В первую очередь, необходимо понимать, что любая клеточная поверхность содержит молекулы, содержащие данные о клетке, называющиеся антигенами и подразделяющимися на:

Индивидуальные антигены, несмотря на некоторую схожесть, имеют и множество различий. Они имеются у одного конкретного организма и никогда не повторяются в других. Видовые антигены можно обнаружить в организмах тех или иных видов живых существ. Так, например, обезьяны, лошади или собаки имеют свой, ни на что не похожий антиген. Именно поэтому антигены этого типа используются иммунной системой для распознавания своих и чужих клеток, что, собственно говоря, и лежит в основе иммуноферментного анализа крови.

Как распознаются антигены? Здесь все достаточно понятно. Говоря простым языком, клетка, являющаяся иммунной, отлавливает клетку, вызвавшую у нее «подозрение», и сравнивает ее антиген с имеющимся в памяти описанием. Если антиген вызвавшей сомнение клетки соответствует ему, то иммунная клетка «отпускает» ее и отправляется дальше. Если же описание отличается, то ответ организма на угрозу один – уничтожение. Причем распознавание «врага» в данном случае равняется почти 100%.

Иммуноанализ сэндвич-типа Sandwich-type immunoassay

Рис. 2. Схематическое изображение иммуноанализа «сэндвич»-типа. АТп — антитело подложки, АТд — детекторное антитело, АГ — антиген, М — метка, ковалентно связанная с детекторным антителом, П — подложка, на которую сорбируется антитело подложки.

В данном варианте иммуноанализа (Рис.2) используется пара антител, специфичных к пространственно удаленным эпитопам исследуемого антигена.

I. Сорбция антител подложки

В лунки 96-луночного планшета для проведения иммуноанализа сорбируют антитела подложки 1-2 мкг в лунку в 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS). Инкубация проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка (2-х кратная) несвязавшихся молекул антигена осуществляется фосфатно-солевым буфером содержащим 0,1% Tween-20 (PBSТ).

II. Блокировка

Для блокирования мест неспецифичного связывания лунки планшета заполняют PBST и инкубируют в течение 10-15 минут при комнатной температуре.

III. Инкубация с антигеном

В лунки планшета с преадсорбироваными антителами вносят по 50 мкл исследуемого раствора либо стандартных разведений антигена. Разведения антигена должны быть приготовлены на основе PBST, поскольку Tween-20 снижает неспецифичное связывание белковых молекул друг с другом и с поверхностью планшета. И исследуемый раствор, и стандартные разведения антигена вносят попарно (либо по 3 повторности), используя по две (три) лунки на каждое разведение белка. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Отмывка осуществляется раствором PBST 3 раза.

IV. Инкубация с антителами, конъюгированными с ферментной меткой

В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой. Оптимальная концентрация конъюгированных антител как правило указывается производителем (обычно используют концентрацию 2-4 мкг/мл). Инкубация с антителами, содержащими ферментную метку, проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется с помощью PBSТ 5-6 раз.

V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта

В лунки вносят по 100 мкл раствора субстрата и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре и постоянном перемешивании.

VI. Остановка ферментативной реакции

Перед измерением оптической плотности проводят остановку цветной реакции с помощью 0,5 М H2SO4. В лунки с рабочим раствором ОФД после инкубации вносят по 50 мкл раствора 0,5 М серной кислоты. После этого можно сразу приступать к измерению оптической плотности.

VII. Измерение оптической плотности

Оптическая плотность раствора окрашенного продукта измеряется при λ=490 нм с использованием планшетного спектрофотометра.

Версия для печати

Подробнее об иммуноглобулинах

Всего человеческий организм вырабатывает 5 известных классов антител, которые обозначаются Ig (что расшифровывается как иммуноглобулины), которые принадлежат классам A, M, G, E, и D. Все они имеют большое значение в интерпретации результатов ИФА – анализа. Конечно, комплексов значительно больше, и далеко не все они еще открыты. Но в диагностике разных болезней наиболее ценны первые три типа антител. Анализ крови на ИФА использует максимум информации: момент появления антител в крови, изменение их концентрации в зависимости от времени, срок исчезновения, а также тип специфических антител.

Так, участниками первичного, острого инфекционного процесса являются иммуноглобулины класса М, которые всегда свидетельствуют об острой фазе, даже в том случае, когда клинически болезнь протекает стерто. Характерный пример – безжелтушная форма острого вирусного гепатита В или С. Иммуноферментный анализ крови на гепатиты покажет, что у человека есть острый гепатит, и такие симптомы, как боли в подреберье, сухость во рту, ломота в суставах и другие неспецифические симптомы становятся легко понятными.

Спустя несколько недель эти антитела обнаруживаются во все более исчезающей концентрации, уступая иммуноглобулинам класса G. Они определяются в крови долгие месяцы, и даже годы, и свидетельствуют или о выздоровлении, и тогда могут оставаться пожизненно, формируя прочный иммунитет. Это свидетельствует о мощной защите от антигенов возбудителей. Так, именно антитела этого класса делают человека невосприимчивым к повторным случаям заболевания сибирской язвой и чумой. Но бывают случаи, когда эти антитела не препятствуют при наличии антигенов их вредному влиянию. В таком случае речь может идти о повышении активности хронического процесса.

Что касается IgE, то он имеет применение в диагностике различных паразитарных инвазий и аллергических состояний, а IgD выполняет вспомогательную функцию: метод иммуноферментного анализа позволяет использовать его в комплексной диагностике бронхиальной астмы и аутоиммунных состояний. Конечно, расшифровка ИФА-анализа значительно более сложная, и специалисты – иммунологи могут рассказать гораздо больше. По каким же показаниям пациент может самостоятельно обратиться в лабораторию, чтобы выполнить исследования?

Как проводят анализ ИФА

В условиях оборудованных лабораторий и медицинских центров определение трепонем методом иммуноферментной реакции может производиться несколькими методами, которые называются прямыми и непрямыми. Однако в основе данных реакций лежит один способ, который позволяет произвести анализ на сифилис методом ИФА. Проводится данный тест определенным образом.

У врача лаборанта имеется специальный планшет – панель с лунками в виде углублений округлой формы в количестве до ста. Используются также специально приготовленные концентрированные антигены к сифилису в наборах для данного анализа, которые помещаются в лунки планшета ИФА. После взятия крови пациента в утренние часы натощак из крови отделяется сыворотка и помещается в лунки с антигенами. В лунках происходит реакция связывания антигена с антителами.

Метод ИФА на сифилис основан на реакции связывания иммунных соединений первого этапа и конъюгатов со специальной ферментной меткой, которая нужна для считывания качества реакции. На данном этапе помимо ферментной пероксидазы вносится хромогенные красящие вещества, для окрашивания материала в зависимости от исхода реакции.

На основании появившихся окрашенных лунок в планшете производится расшифровка теста. В наборах к различным методам ИФА прилагаются таблицы цветовых схем, по которым определяется количество, уровень иммуноглобулинов, антител из сыворотки пациента в 1 единице объема.

Также для оценки исхода реакции используется специальное оборудование — спектрофотометр для проведения фотометрирования и оценки плотности материала в лунках по сравнению с контрольными пробами. На основании плотности и получают результат, четко установленный для каждого возбудителя сифилиса в пределах норм и патологии.

Общая информация

Иммуноферментный анализ крови может использоваться для определения уровня гормонов, иммуноглобулинов, комплексов иммунологического типа, а также ряда биологически активных веществ. В качестве материала для такого исследования можно сдать кровь, спинномозговую жидкость, содержимое стекловидного тела и т.д.

Иммуноферментный анализ крови в последнее время применяется все чаще из-за целого ряда преимуществ:

  • чувствительность свыше 90 процентов;
  • стабильное хранение ингредиентов нужных для проведения;
  • быстрая и удобная диагностика;
  • минимальные затраты материалов;
  • автоматизированный процесс;
  • невысокая стоимость.

Кроме этого, анализ крови методом ИФА позволяет на раннем этапе выявить инфекции, в том числе гепатит. Именно поэтому его иногда рекомендуют вместо ПЦР-исследования, а также при беременности. Однако без минусов не обходится. Результаты такого тестирования будут говорить лишь об ответе организма на возбудителя, однако сам он определен не будет. В большинстве случаев рекомендуется сочетание тестов ИФА и ПЦР.

С помощью ИФА тестирования можно узнать результаты по целому набору. В частности, будет определена норма гормонов щитовидной железы, наличие онкомаркеров, ряда инфекций. Норма при этом подбирается для каждого показателя отдельно. Так для взрослых людей ИФА в норме должен продемонстрировать цифры по ТГ в пределах 70 МЕ/мл, по Т4 в промежутке от 64 до 146 нмоль/л, Т3 подсчитывается в количестве 1,8-2,8 нмоль/л.

При планировании беременности такое тестирование может сдаваться для определения половых гормонов. В частности, лютеинизирующего. Его значения будут меняться в зависимости от дня цикла. В частности, максимальный показатель, который может наблюдаться, составляет 150, а минимальный 1 мЕд/л.

Когда ИФА используется для определения полового гормона у мужчин, нормальным показателем будет цифра в пределах от 0,5 до 10 мЕд/л. Если исследуется хронический гонадотропин, то результаты будут варьироваться от пола человека. В частности, для взрослых мужчин и женщин при отсутствии беременности показатель должен быть в пределах 5 мЕд/мл. Если же тестирование выполняется во время беременности, то результаты могут быть различные, в зависимости от триместра, вплоть до десятков тысяч единиц.

Что такое хламидиоз

ПЦР, как и ИФА широко применяется в современных лабораториях для диагностики заболеваний, передающихся половым путем. При этом врачи зачастую предлагают выполнить оба теста. Многие пациенты считают, что это лишнее вытягивание денег, однако тесты эти имеют серьезное различие, хотя на первый взгляд могут показаться идентичными. Однако здесь в некоторой степени может быть применена классификация методов психологического исследования

Результаты анализов ПЦР и ИФА часто используются во время беременности, когда нужно исключить хламидийную инфекцию. Зачастую такой положительный результат на инфекцию является ответом на вопрос мужчин и женщин «Почему не получается забеременеть». Кроме риска бесплодия, хламидиоз во время беременности создает риск заражения ребенка.

Главная проблема для диагностики такой инфекции – это бессимптомное протекание. Однако специфические антитела могут быть выявлены уже спустя десять дней после инфицирования. Если ПЦР исследование во время беременности продемонстрирует наличие или отсутствие таких возбудителей, то ИФА расскажет вам в какой стадии сейчас процесс

Такое исследование также важно, чтобы оценить результаты терапии

Расшифровка анализа

Анализ на гепатит или любой другой возбудитель в ИФА исполнении нередко вызывает вопросы. В частности, как проводится расшифровка. На данный момент в результатах указывается один из пяти иммуноглобулинов: IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. Выделяются именно они, поскольку роль остальных не была выяснена до конца. Наиболее важными для исследования являются классы А, М и G.

Иммуноглобулин А в первую очередь отвечает за защитные функции слизистых. Результат на их присутствие будет отрицательный, если ведется определение заболевания в его острой форме в самом начале. Появление таких защитных маркеров обычно происходит спустя две недели с начала заболевания. Иногда положительный результат получается и того позже.

Главной функцией данных антител является обнаружение и уничтожение микроорганизмов. Количество их неизменно сокращается, если заболевание стихает. Обычно, спустя восемь недель с начала болезни положительный результат снова будет отсутствовать. Обнаружение иммуноглобулинов класса А в более поздние сроки может говорить о перетекании процесса в хронический.

В качестве главных маркеров, расшифровка которых помогает определить острую фазу патологии, выступают иммуноглобулины, относящиеся к классу М. Обнаружить в крови их можно спустя пять суток после инфицирования. Задерживаются они в крови примерно на шесть недель, после чего исчезновение их происходит быстро.

За формирование остаточного иммунного эффекта отвечают иммуноглобулины класса G. Примерно спустя месяц после инфицирования они начинают обнаруживаться в крови. В дальнейшем определение их растягивается на долгие месяцы. Нередко наблюдать их можно всю жизнь. Такие иммуноглобулины формируются как защитная реакция, которая позволяет исключить повторное инфицирование. Например, такие иммуноглобулины образуются в крови человека, переболевшего в детстве ветрянкой, а соответственно, получившего иммунитет до конца жизни. Конечно, бывают и другие инфекции, повторное возвращение которых возможно. В таком случае анализ обнаружит повторный рост данной группы иммуноглобулинов.

Иммуноглобулины Е используются для выявления паразитов в организме. Иммуноглобулин, относящийся к группе D, расположен в В-лимфоцитах и присутствует в некотором количестве у здоровых людей. Примерно в десятилетнем возрасте им достигаются свои максимальные значения. Количество такого иммуноглобулина растет во время беременности. Кроме этого, наличие его в большем, чем это принято количестве, может быть признаком бронхиальной астмы, иммунодифицитного состояния.

Расшифровка

Антитела, они же иммуноглобулины, делятся на пять классов, но обычно определяются только три из них: М,G и А, которые в организме накапливаются в разные периоды после инфицирования.

Самыми первыми появляются иммуноглобулины М, они же IgM. Возникают они с через 4-5 суток после заражения и в крови находятся полтора месяца, после чего исчезают. Если анализ ИФА показывает их присутствие, мы имеем дело с острым периодом болезни или её обострением.

Недели через три-четыре возникают IgG, то есть иммуноглобулины класса G. Они могут присутствовать у нас несколько месяцев и даже лет подряд. Если анализ ИФА проведен был два раза с промежутком в две недели, а количество IgG в обеих пробах был увеличен, речь может идти об инфекции или повторном заражении ею.

IgA, то есть антитела класса А выявляются уже после обострения инфекции или через месяц после её появления в организме. Большинство из них циркулируют в наших слизистых оболочках и только одна пятая часть – в крови. Пропадают они только после того, как все инфекционные агенты уничтожены, то есть минимум через две недели после заражения, максимум – через восемь.

Если после излечения анализ ИФА показывает их наличие, недуг перешел в хроническую стадию.

Когда расшифровка проводится, нужно обратить внимание еще и на знаки + и – в бланке. Полноценный вердикт может вынести только врач, но о некоторых особенностях организма можно судить исходя из следующих данных:

Полноценный вердикт может вынести только врач, но о некоторых особенностях организма можно судить исходя из следующих данных:

  • Об отсутствии иммунитета к инфекциям свидетельствуют такое сочетание показателей, как JgM , JgG, JgA с минусом везде;
  • О наличии иммунитета после вакцины или инфекции свидетельствуют JgM и JgA со знаком минус и JgG со знаком плюс (JgG (+));
  • Про наличие острой инфекции могут рассказать следующие показатели: JgA (-/+),JgG (-/+) и JgM (+);
  • При обострении хронических инфекций в бланке будут следующие обозначения: JgM, JgG и JgA с плюсами везде;
  • При хронических инфекциях наблюдается следующая картина: JgG (+/-),JgM (-), и JgA (+/-);
  • О выздоровлении свидетельствует пометка JgM (-).

Также нередко проводится такое исследование, как иммуноферментный анализ кровяной сыворотки. Он нужен для исследования гормонов щитовидной железы. Важны здесь показатели таких гормонов, как тироксин, свободный тироксин, трийодтиронин, свободный трийодтиронин и тиреоглобулин.

Читайте также:  Ретроградная уретеропиелография

Кроме того, такое исследование пригодится для диагностики инфекционных и аутоиммунных болезней.

Иммуноферментный анализ крови — описание метода, преимущества и недостатки, расшифровка результатов

Современная диагностика не обходится без лабораторных высокочувствительных анализов. Раньше для установления причины заболевания и обнаружения возбудителя инфекции врачи проводили разные микроскопические многоступенчатые исследования. Сегодня, чтобы опровергнуть или подтвердить первоначальный диагноз, надо сделать единственный тест – иммуноферментный анализ (ИФА). Данное лабораторное исследование помогает оценить состояние здоровья человека и диагностировать гематологические, онкологические, аутоиммунные, инфекционные патологии.

Что такое иммуноферментный анализ крови

Метод иммуноферментного анализа – это современное лабораторное исследование крови на присутствие в ней антигенов, антител к возбудителям и вирусам болезни. Метод ИФА помогает врачу выявлять этиологию заболевания, определять ее фазу, давность происхождения, уровень опасности для человека и вносить в лечение необходимые корректировки. Чаще других при иммуноферментном анализе исследуют наличие антител групп M и G. Что они из себя представляют?

При попадании патогенного микроорганизма в кровоток, иммунная система включает защитную реакцию в виде выделения антител (иммуноглобулинов). Эти вещества связываются с клеткой и выявляют, является ли она частью организма или пришла извне. Если система установила, что микроорганизм чужеродный, то число антител возрастает с целью борьбы с болезнетворным вирусом. Иммуноглобулины (Ig) бывают нескольких видов: одни появляются в период инфицирования, другие остаются на протяжении всей жизни, вырабатывая стойкий иммунитет. Антитела в медицине обозначаются: A, D, E, M, G.

Методом ИФА исследуют кровь, хотя существует и другие виды иммуноферментного анализа. Как правило, они различаются типом взятой жидкости, на основании которой далее проводится изучение состава и определение наличия антигенов. При этом для исследования берется как кровь человека, так и другие жидкости:

  • содержимое стекловидного тела;
  • слизь из цервикального канала и уретры;
  • околоплодные воды;
  • мазки;
  • спинномозговая жидкость.

Показания к назначению

Иммуноферментное исследование крови помогает выявить онкомаркеры (факторы раково-эмбрионального антигена, некроза опухоли, аденомы простаты и других). Также анализ определяет недуги щитовидной железы, исследуя гормональные включения в сыворотке крови (пролактина, прогестерона, тиреотропного гормона (ТТГ), тестостерона). ИФА помогает выявить наличие поражения организма кишечными паразитами и гельминтами. Кроме того, исследование назначают пациентам, у которых необходимо определить наличие следующих заболеваний:

  • аллергических реакций;
  • иммунодефицита;
  • недугов вирусного происхождения (гепатит, герпес, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус);
  • венерических болезней, передающихся половым путем ЗППП (уреаплазма, сифилис, трихомонада, хламидиоз, микоплазма);
  • болезней печени;
  • нейросифилиса (инфекционное поражение ЦНС (центральной нервной системы)).

Анализ крови на ИФА часто проводится во время предоперационного комплексного обследования для определения уровня гормонов и оценки качества проводимого лечения. Высокая точность полученных данных помогает врачу иметь представление о развернутой картине состояния здоровья. При этом получение результатов происходит за короткий временной промежуток, что позволяет отслеживать динамику развития заболевания.

Преимущества метода

Бесспорными плюсами метода ИФА крови является высокая чувствительность, т.е. возможность определить искомое вещество, даже при малой его концентрации; и специфичность, подразумевающая безошибочность диагностики. Кроме того, исследование сыворотки крови методом ИФА имеет следующие преимущества:

  • возможность проведения процедуры во время беременности;
  • расшифровка результатов помогает выявить стадию и развитие заболевания;
  • точное определение концентрации ТТГ для установления патологии или нормы;
  • возможность проведения полноценной диагностики на раннем сроке болезни;
  • раннее обнаружение ЗППП;
  • проведение ИФА возможно даже при температурных колебаниях окружающей среды;
  • быстрый срок предоставления результата;
  • удобство и простота проведения анализа;
  • высокая чувствительность;
  • реагенты для проведения исследования могут храниться около года;
  • возможность проведения массового обследования в очагах инфекции;
  • раннее выявление паразитов;
  • отслеживание динамики прогрессирования инфекционного заболевания;
  • минимальное влияние человеческого фактора;
  • для анализа нужен небольшой объем биоматериала.

Недостатки

Главным недостатком иммуноферментного анализа крови считается то, что при проведении исследования врач заранее должен иметь предположение о природе болезни. При диагностике инфекционных заболеваний нельзя случайно найти возбудителя и установить его иммуноферментные свойства. Тест лишь способен указать на наличие антител в крови пациента, косвенно свидетельствующих о присутствии вредоносного микроорганизма.

Кроме того, при нарушении техники выполнения или неправильной подготовке, анализ может показать ложноположительный или ложноотрицательный результат. Исследование сыворотки крови ИФА – точный, но при этом дорогой метод, поэтому к нему следует обращаться в крайних случаях. Интерпретацию результатов надо доверять лишь квалифицированному специалисту.

Подготовка

Иммуноферментный анализ необходимо проводить, придерживаясь рекомендаций врача, т.к. на результаты исследования часто влияют разные внешние факторы. Основные правила подготовки к ИФА:

  • венозную кровь надо сдавать строго натощак (в норме, последний прием пищи должен быть за 12 часов до исследования);
  • необходимо накануне проведения анализа исключить прием любых лекарственных препаратов (если пациент принимает антигистаминные (противоаллергические) средства, следует проконсультироваться с доктором о том, за сколько до начала ИФА надо их отменить);
  • нельзя перед обследованием курить и пить алкогольные напитки, т.к. это негативно повлияет на результат;
  • следует обязательно выспаться перед анализом;
  • надо исключить любые физические нагрузки, стрессовые факторы;
  • диагностика большинства гормонов женской репродуктивной системы потребует взятия крови в определенные дни менструального цикла.

Как проводится

Для проведения иммуноферментного анализа у пациента берется кровь из локтевой вены строго натощак. Больной заранее должен сообщить врачу о наличии болезней и принимаемых препаратах, чтобы результаты исследования не были искажены. Как правило, все лекарства надо прекратить пить за 16 дней до ИФА. Ощущения при проведении процедуры похожи на взятие крови во время биохимического анализа.

Материал отправляют в лабораторию, где из крови выделяют сыворотку, в которой находятся антитела. Полученный состав помещают в пробирку с антигенами. Это могут быть самые разные аллергены (молоко, шерсть, пыльца, цитрусовые), возбудители вирусных и инфекционных болезней и другие. После получения реакции все остатки сыворотки сливают. При помощи специальных индикаторов специалисты определяют количество антител. Срок выполнения ИФА зависит от лаборатории. Как правило, результаты исследования могут предоставить в срок от двух дней до недели.

Расшифровка ИФА

Иммуноферментный анализ крови помогает определить наличие в организме антител. Существуют несколько классов иммуноглобулинов:

  1. IgM. Появляются самые первые после заражения. Наличие данных антител указывает на появление болезни в любом случае, т.к. у здорового человека этот класс отсутствует. Как правило, иммуноглобулины IgM присутствуют в крови примерно 6 недель.
  2. IgA. Антитела содержатся в большом количестве в слизистых оболочках, защищая организм от проникновения патогенных микробов. Если у пациента присутствует данный класс, необходимо интенсивнее бороться с болезнью. Ведь иммуноглобулины А возникают лишь при хроническом заболевании. Исчезновение IgA свидетельствует об уничтожении инфекции.
  3. IgG. Иммуноглобулины данного класса свидетельствуют о том, что человек либо является носителем инфекции, либо уже перенес заболевание. Данные антитела вырабатываются после IgM через месяц после заражения. Иммуноглобулины класса G могут присутствовать в организме на протяжении 5-6 лет, защищая его от рецидива заболевания, а при сифилисе такие антитела находятся пожизненно.

При проведении анализа ИФА в детском возрасте (до 1,5 лет) следует учитывать, что кровь ребенка содержит антитела IgG матери к инфекциям. Хотя это не означает, что малыш болен, скорее данный факт – норма. Наличие класса M свидетельствует о внутриутробной или приобретенной после рождения инфекции, т.к. антитела IgM матери не способны проникать в детский организм через плаценту. Расшифровка возможных комбинаций наличия или отсутствия антител 3 классов представлена в таблице:

Как проводится и что показывает иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.

Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.

Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Преимущества метода

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Показания к назначению и выявляемые заболевания

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

  1. Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
    • IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
    • IgG к ВИЧ;
    • Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
    • Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
    • Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
    • Ig M и IgG к токсоплазмозу;
    • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
    • IgG к паразитарным заболеваниям;
    • Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
    • IgG к хеликобактерной инфекции.
  2. Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.
  3. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).
  4. Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Анализируемый биоматериал и особенности его забора

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

Сроки готовности результатов ИФА

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Расшифровка иммуноферментного анализа

Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

Анализируемые показатели

  • IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
  • IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
  • IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
  • IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Читайте также:  Миелография, ЭЭГ

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

Где можно сдать биоматериала на иммуноферментный анализ?

Информативность ИФА делает этот анализ важным инструментом в работе многих медицинских центров. Но можно ли доверять такую диагностику государственным лабораториям или лучше самим выбрать, где провести такое исследование?

«Хронические инфекции — большая проблема современной медицины. Когда по разным причинам не удается вовремя поставить диагноз, болезнь переходит в вялотекующую стадию и постепенно подтачивает организм, — рассказывает специалист сети независимых лабораторий «ИНВИТРО». — В поликлиниках и стационарах, работающих в рамках общественной системы здравоохранения, не всегда есть ресурсы для целенаправленного поиска таких инфекций, поэтому бывает, что врачи предоставляют разбираться с проблемой самостоятельно. Но не стоит обращаться в первую попавшуюся частную лабораторию, конечно, если вам не нужен сомнительный результат, который никак не поможет в диагностике. Только те медицинские центры, которые работают в соответствии с международными стандартами качества, могут провести ИФА по всем правилам, избежав ошибок и искажений в процессе анализа. Так, наша лаборатория «ИНВИТРО» одной из первых предложила пациентам проведение ИФА в частном порядке, и за минувшие двадцать лет мы завоевали безупречную репутацию и помогли сотням тысяч человек».

Иммуноферментный анализ крови с расшифровкой показателей

Диагностические методики современности дают возможность в условиях лаборатории выявить то или иное заболевание с помощью специальных анализов. К одним из таких стоит отнести иммуноферментный анализ крови, благодаря которому можно подтвердить предварительно поставленный диагноз.

Что такое иммуноферментный анализ крови

Иммуноферментный анализ ИФА является одним из самых эффективных и современных способов, позволяющих выявить болезни инфекционного плана , нарушения, связанные с иммунными и гормональными сбоями, а также онкологические процессы. Во время проведения анализа в крови можно обнаружить антитела, вырабатывающиеся при наличии в организме инфекции. Учитывая этот нюанс, обнаружить болезнь можно даже на самом раннем этапе её развития.

Что лежит в основе методики

В основе результатов ИФА анализа лежит получение химических реакций на ферменты, служащие особенными опознавательными знаками для распознания антител. Следовательно, во время иммунохимических реакций антитела начинают взаимодействовать с некоторыми антигенами. Всё это даёт основания утверждать, что ложные результаты при сдаче крови на ИФА минимальны.

Исследование позволяет определить количество иммунных клеток, их свойства, а также наличие необходимых антител

Положительным результат считается тогда, когда обнаруживается окрашивание раствора. Окрас сигнализирует о том, что антигены взаимодействуют с антителом. В случае когда ничего подобного не происходит, результат является отрицательным.

Положительные стороны ИФА

Учитывая, что в основе методики лежит способ получения иммунного ответа от человеческого организма, такой метод является непрямым методом диагностики.

Плюсы иммуноферментного анализа крови:

  • Наличие разных модификаций анализа.
  • Высокая точность и технологичность.
  • Вероятность получения ошибочного анализа сводится практически к нулю.
  • Применяется для диагностики заболеваний не только у взрослых, но и у детей.
  • Универсальность. Забор анализа позволяет подтвердить наличие заболевания или наоборот опровергнуть опасения.

Какие заболевания можно выявить с помощью ИФА

Как уже говорилось выше, при помощи анализа можно выявить целый ряд нарушений, характерных для наличия того или другого недуга. Поэтому многие специалисты назначают большинству пациентов именно ИФА.

На сегодняшний день анализ крови с помощью вышеописанной методики даёт возможность обнаружить наличие многих инфекций, приведенных в таблице:

Название заболеванияОписание
Вирусные гепатитыЭто распространённые и опасные недуги печени, которые обычно вызваны вирусами.
На сегодняшний день существует пять видов вирусов, которые могут привести к гепатиту. Их обозначают такими латинскими буквами: A, B, C, D, E.
СифилисЭто венерическое заболевание, которое очень легко выявить методом ИФА.
Очень важно обнаружить этот недуг как можно быстрее, чтобы он не сказался негативно на общем состоянии здоровья.
Цитомегаловирусная инфекцияЦитомегаловирус является возбудителем заболевания.
Болезнь может передаваться от матери к ребёнку (внутри утробы), воздушно-капельным способом или при половом контакте с носителем. Поэтому обычно анализ крови на ИФА назначают всем будущим мамам.
ВИЧВирус иммунодефицита – это то заболевание, которое прогрессирует очень медленно, но, несмотря на это, является крайне опасным.
Причина заключается в том, что вирус постепенно атакует клетки иммунитета, в результате чего организм становится уязвимым к любым, даже к самым незначительным микробам и бактериям.
ХламидииБлагодаря иммуноферментному анализу можно не только подтвердить наличие инфекции, но и определить очень точно гормоны, антитела, антигены и многое другое, что позволяет качественно и эффективно провести лечение.
Кроме этого, анализ даёт возможность максимально точно понять, когда произошло заражение и какие негативные последствия были вызваны в организме при наличии хламидий.
ГерпесГерпес может передаваться и воздушно-капельным путём, и во время незащищённого полового акта. Этот недуг опасен тем, что негативно сказывается на работе многих систем организма.
Определить вирус можно качественным и количественным способами. Если используется первый метод, тогда удаётся выявить наличие антител, тип вируса, а также возможность существования предшествующих рецидивов. Что касается количественного, то он даёт возможность определить тип антител или, проще говоря, состояние иммунитета против вируса.

Принимая во внимание тот факт, что выявление заболевания возможно даже на раннем этапе, недуг можно начать лечить сразу же, следовательно, появляется возможность забыть о нём достаточно быстро.

Как следует готовиться к сдаче анализа

Иммуноферментный анализ крови сдаётся из вены, а не из пальца, как думают некоторые. Дабы данные были верны, следует выполнить ряд несложных правил.

Проба крови для исследования берется из локтевой вены

  • За пару дней до сдачи анализа не поднимать тяжестей и не выполнять тяжёлую физическую работу.
  • За сутки не употреблять алкоголь и не курить (нельзя даже находиться в накуренном помещении).
  • Соблюдать максимальное спокойствие.
  • Сдавать анализы можно не раньше, чем через 10 дней после того, как употреблялись какие-либо лекарственные средства.

Некоторые таблетки могут влиять на результат анализа, поэтому если отменить приём невозможно, об этом следует сказать доктору.

Некоторые специалисты рекомендуют также за пару дней до анализа сесть на лёгкую диету. Речь идёт о воздержании от копчёной, жареной и солёной пищи. Если кровь сдаётся, чтобы выявить наличие гепатита, то нельзя употреблять также цитрусовые в виде фруктов и в виде сока.

Специалисты рекомендуют за пару дней до анализа сесть на лёгкую диету

В случае когда необходимо выявить нарушение гормонального фона, на общий анализ может повлиять месячный цикл женщин. В этом случае доктор сам назначает дату, когда сдача анализа будет наиболее оптимальной.

Ниже будет представлена таблица, в которой указаны изменения нормального уровня лютеинизирующего полового гормона, исходя из дня менструального цикла.

Данные изменений нормального уровня лютеинизирующего полового гормона в таблице

Кол-во днейУровень гормона
1-12 день12-14 мЕд/л
12-14 день24-150 мЕд/л
С 15 дня до начала нового цикла2-17 мЕд/л

Анализ даёт возможность выявить разные виды антител в организме, которые показывают себя на каждом этапе развития болезни. Когда недуг только дал о себе знать, активно вырабатываются антитела класса IgM. Если их удалось обнаружить, значит, возникло какое-то заболевание.

После выработки IgM начинается производство IgG свидетельствующее о том, что человек либо является носителем инфекции, либо он недавно переболел чем-то инфекционным. Обычно выявить IgG можно после 3-4 недель, отсчитывая от начала развития IgM, но некоторые антитела могут находиться в организме годами.

Есть ещё такой класс антител, как IgA, который свидетельствует о наличии в организме хронической инфекции. При его обнаружении начинается незамедлительное лечение, а после этого ещё раз сдаётся анализ крови ИФА, дабы убедиться, что лечение принесло свои плоды.

Немного иначе ситуация обстоит с детьми в возрасте до полутора лет, в организме которых на первых этапах жизни для обеспечения надёжной защиты от вирусов в большом числе присутствуют антитела IgG. Поэтому при проверке малышей основное внимание уделяют классу IgM.

Ниже представлена таблица, в которой указаны комбинации наличия или отсутствия инфекции.

Таблица расшифровок норм анализа крови ИФА на наличие (отсутствие) инфекций

IgMIgGIgAРасшифровка показателей
Иммунитет к инфекции отсутствует
+Имеется поствацинальный (специфическая невосприимчивость к инфекционному заболеванию, появляющаяся в результате вакцинации) или постинфекционный иммунитет
+-/+-/+Острая инфекция
+++Обострение хронической инфекции
+/-+/-Наличие хронической инфекции

Делая выводы, можно сказать, что когда в организме обнаруживаются антитела определённого вида, тогда в таблице рядом со значением стоит знак «+».

Иногда после получения анализа доктор может назначить проведение ещё одного с целью выявление количественного содержания вещества в организме.

Расшифровкой иммуноферментного анализа крови должен заниматься только специалист, который сопоставит полученные результаты с имеющимися симптомами и назначит грамотное лечение.

ИФА: что за исследование, когда и как проводится, и что показывает?

Иммуноферментный анализ крови – одно из важнейших исследований, проводимых для оценки способности организма человека противостоять атаке болезнетворных микроорганизмов. Оно позволяет понять, насколько хорошо иммунная система справляется с инфекционными процессами. Это, в свою очередь, дает возможность скорректировать схему лечения, если таковое проводится.

И это еще далеко не все особенности данного теста, поэтому давайте подробно рассмотрим вопросы, что такое ИФА анализ, кому он показан, как он выполняется, и о чем могут говорить полученные данные.

Что это за исследование

Итак, что это такое – ИФА анализ? Расшифровывается данная аббревиатура как «иммуноферментный анализ». Проводится он в том случае, если необходимо определить наличие антител к разного рода антигенам.

Антигенами называются болезнетворные агенты, способствующие развитию различных патологий. Антитела – вещества, которые необходимы для уничтожения чужеродных клеток.

Иммуноанализ крови направлен на определение уровней иммуноглобулинов, которые могут объединяться в иммунокомплексы. Они активно вырабатываются иммунной системой в ответ на внедрение в организм антигенов.

Примечание. Для борьбы с каждым отдельным видом антигена вырабатываются свои специфические антитела. Именно это помогает выявить болезнь, и даже ее стадию, с помощью иммуноферментного исследования крови.

При проникновении чужеродного антигена в организм человека антитела «связываются» с ним, после чего нейтрализуют его воздействие. Происходит это за счет ферментативного лизиса и реакций фагоцитоза. Благодаря такому процессу антигены выводятся из крови.

Когда назначается тест?

Разобравшись в том, что такое иммуноферментный анализ, разберемся в ситуациях, при которых показано его проведение. Так, исследование необходимо при:

  • онкологических заболеваниях;
  • вирусных гепатитах;
  • герпетических высыпаниях на коже или слизистых оболочках;
  • сальмонеллезе;
  • кори;
  • энцефалите;
  • сифилисе;
  • дизентерии;
  • атопических дерматитах или нетипичных проявлениях аллергических реакций.

Помимо этого, метод ИФА применяется для определения и выявления возбудителей:

  • заболеваний, передающихся половым путем;
  • цитомегаловирусной инфекции;
  • гельминтозов.

Иммуноферментный анализ – это исследование, помогающее определить природу эндокринных заболеваний, а также выявить наличие иммунодефицита и бесплодия у мужчин и женщин. С его помощью составляются прогнозы дальнейшего течения инфарктов, инсультов, неврологических и почечных заболеваний.

Проводится ИФА анализ и в профилактических целях. Обязательно его выполняют при беременности, а также пациентам, ранее перенесшим вышеописанные заболевания. Лица, входящие в группу риска развития ранее упомянутых болезней тоже регулярно сдают кровь на ИФА.

Особенности проведения теста и расшифровка

В большинстве случаев для иммуноферментного исследования берется кровь больного. Но при определенных обстоятельствах может осуществляться забор тканей с поверхности стекловидного тела. У беременных женщин ИФА диагностика может проводиться посредством изучения состава околоплодных вод.

Забор крови выполняется с использованием шприца, при этом материал для исследования берут, как правило, из вены, походящей на внутренней стороне локтевого сгиба. Пациент при этом должен находиться в расслабленном состоянии, в положении сидя.

Важно! Результаты теста, его и расшифровка данных зависит от методики проведения диагностической манипуляции, и используемого при этом оборудования. Как правило, каждая лаборатория указывает на бланке нормы показателей иммуноглобулинов.

Особенности подготовки

Анализ крови на ИФА требует выполнения определенных подготовительных процедур:

  • отказа от завтрака в день теста;
  • прекращения приема препаратов, разжижающих кровь, и других фармакологических средств, способных повлиять на результаты (после предварительной консультации у лечащего врача);
  • воздержания от курения в день исследования;
  • отказа от употребления спиртного за день до забора крови;
  • исключения приема наркотических веществ (в том числе, и медпрепаратов, которые их содержат).

Соблюдение таких правил подготовки к иммунохимическому анализу крови исключает возможность искажения данных.

Трактовка данных

Результаты исследования выдаются пациенту на руки, после чего он проходит повторную консультацию у специалиста. Расшифровка данных ИФА может быть положительной или отрицательной. При этом в расчет также принимаются цифры, обозначающие уровень иммуноглобулинов (если таковые были обнаружены).

Если ИФА отрицательный, это может говорить об отсутствии патологических процессов, либо о начальной фазе их развития. Также «минусовый» результат исследования наблюдается при выздоровлении пациента после пройденного курса терапии. Но подобные данные можно получить только по истечении определенного промежутка времени (1 – 2 месяцев).

Если иммуноглобулины IgA и IgM в крови отсутствуют, а анализ ИФ показал положительный результат на IgG, это может свидетельствовать о том, что у пациента сформировался стойкий иммунитет к определенному виду антигенов. Подобное происходит при иммунизации.

При высокой концентрации IgM на фоне отсутствия IgG и IgA речь может идти о воспалительном процессе, протекающем в острой фазе.

Что означает, если ИФА положительный для всех видов иммуноглобулинов? В подобных случаях речь может идти о рецидиве инфекционной патологии. При этом возникновение антител фиксируется только при острой фазе хронической болезни.

При переходе заболевания в фазу затухания показатели IgM будут отрицательными. А вот ИФА на IgG и IgA будет положительным.

Плюсы и минусы теста

Исследование крови методом ИФА имеет свои сильные и слабые стороны. К плюсам можно отнести:

  • относительно невысокую стоимость;
  • точность;
  • возможность регулярного проведения с целью оценки эффективности проводимого лечения;
  • быстроту выполнения;
  • использование высокоточных и высокоинформативных технологий для получения достоверных результатов;
  • возможность проведения множественных исследований в области одного и того же очага патологического процесса;
  • абсолютную безболезненность;
  • отсутствие любых рисков для здоровья пациента;
  • относительную простоту исследования.

Исследование крови ИФА, благодаря вышеописанным преимуществам, приобрело широкую распространенность, и играет немаловажную роль в диагностике различных заболеваний.

Недостатки

Существенным минусом ИФА крови является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Но это связано в большинстве случаев не с самим методом исследования, а с человеческим фактором.

Еще один нюанс, способный повлиять на конечные данные, – применяемые в ходе теста медикаментозные препараты. При их неправильном использовании, либо же в случае брака, расшифровка анализов ИФА будет недостоверной. Следовательно, исследование придется проводить повторно.

Важно! Повлиять на данные теста может нарушение обменных процессов в организме пациента. Помимо этого, на результатах может сказаться и наличие сразу нескольких очагов инфекционных (хронических!) заболеваний.

Роль ИФА при диагностике паразитарных патологий

Что такое ИФА анализ крови в паразитологии? Это один из самых точных и информативных методов диагностики. Определяется наличие паразитов в организме человека специфическим ИГ Е. При подтверждении диагноза его уровень в крови будет значительно повышен.

Анализ крови методом ИФА проводится для выявления:

  • аскаридоза;
  • описторхоза – острого или хронического;
  • лямблиоза;
  • токсоплазмоза.

Также при проведении исследования в организме пациента могут быть обнаружены острицы или амебы. Диагноз «лейшманиоз» и «трихинеллез» тоже нередко ставятся больным на основании данных анализа крови ИФА.

Такое исследование может давать некоторые погрешности в результатах. Однако его точность при изучении образца крови на обнаружение паразитов составляет почти 90%.

Расшифровка иммунологического анализа крови в паразитологии идентична таковой при других заболеваниях. Положительный результат говорит о наличии патологического процесса, отрицательный – об его отсутствии или начальной стадии развития.

Имейте в виду! Личинки и взрослые особи гельминтов и других паразитов могут обитать не только на стенках органов желудочно-кишечного тракта, что позволяет обнаружить их с помощью исследования кала. Вместе с циркулирующей кровью они способны перемещаться по организму, оседая в почках, сердце, печени, легких, селезенке, и даже головном мозгу. В этом случае выявить их будет крайне проблематично, поскольку яиц глистов в кале зараженного человека попросту не будет. И только с помощью анализа крови на ИФА можно определить их наличие, и принять меры для предотвращения их распространения на здоровые внутренние органы.

Подводим итог

Конечно, самостоятельно разобраться в данных теста очень трудно, поскольку во время этого процесса должны учитываться многочисленные факторы. Вредные привычки, наличие сопутствующих заболеваний, применение определенных групп медикаментозных препаратов – все это играет важную роль, и может повлиять на результаты, что и берется в расчет врачами при расшифровке результатов ИФА.

Однако, «осведомлен, значит, вооружен», поэтому каждому человеку важно знать особенности проведения и трактовки данных тех лабораторных исследований, которые ему назначает лечащий врач. И метод ИФА не является исключением!

Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA). Суть, принцип метода и этапы исследования. Анализ на антитела, классы антител, иммунный комплекс.

В связи с развитием клеточных технологий, молекулярной биологии, генетики, физики, химии и ряда других высокотехнологичных дисциплин в повседневную практику внедряются новые высокоточные и высокотехнологичные методы. Данные междисциплинарные тенденции затрагивают и область медицинских знаний, и смежные области биологических, биохимических проблем. За последние десять лет получил широкое распространение и внедрение в массовую практику метод клинической лабораторной диагностики под названием иммуноферментный анализ.

Вообще технологии иммунологических ферментативных и радиологических реакций широко использовались в типировании клеток, культур клеток, различных тканей с начала 80-х годов XX столетия. Однако методы эти были очень трудоемкими, не унифицированными, не стандартизированными, что исключало их использование в лечебно-диагностических целях в массовом порядке. Такими методами пользовались лишь узкие, наукоемкие и высокоспециализированные лаборатории.

Однако с развитием техники, микротехники, производства различных биополимерных материалов стало возможным производить готовые наборы иммуноферментной диагностики, которыми смогут пользоваться лаборатории лечебно-профилактических учреждений широкого профиля. ИФА широко используется для диагностики всевозможных инфекций (хламидиоз, сифилис, цитомегаловирус, токсоплазмоз, герпес и т.д.), как острых, так и хронических, а также скрытых форм, которые протекают без клинических симптомов.Также этот метод применяют для контроля над хроническими заболеваниями. Давайте постараемся разобраться, что это за метод, и какие принципы лежат в его основе?

Компоненты иммуноферментного анализа – иммунная реакция и ферментативная реакция

Иммунная реакция, что это? Что такое антитело, антиген?

Что такое иммунная реакция? Что такое антиген?
В первую очередь разберем, что такое иммунные реакции. Иммунные реакции – это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. Что это значит? На поверхности каждой клетки любого организма имеются особые структуры, которые называются антигены. Антигены в целом – это молекулы, которые несут информацию о клетке (подобно информации на бейдже у человека, где указываются основные данные этого человека).

Индивидуальные и видовые антигены – что это? Зачем нужны эти антигены?

Имеются антигены индивидуальные, то есть присущие только данному конкретному организму. Эти индивидуальные антигены разные у всех людей, есть похожие друг на друга, но все равно отличающиеся. Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует!

Второй основной тип антигенов – это видовые антигены, то есть присущие какому-либо конкретному виду живых существ. Например, у человека присутствует свой видовой антиген, общий для всех людей, у мышей имеется свой мышиный видовой антиген и т.д. На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген.

Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой».

Как происходит узнавание антигена?

Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет. Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания поражает воображение – 99,97%. Ошибок практически не бывает!

Что такое антитело, иммунный комплекс?
А что представляет собой антитело?

Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку.

Что такое иммунный комплекс?
При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном. В конце концов, антиген оказывается, окружен со всех сторон и прочно привязан.Такой комплекс антиген + антитело называется иммунный комплекс. С этого момента начинается утилизация антигена. Но сейчас подробности процесса нейтрализации антигена нас не интересуют.

Виды антител (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Антитела – это белковые структуры, которые, соответственно, имеют химическое название, которое и используется как синоним слова антитела. Итак, антитела = иммуноглобулины.

Существуют 5 типов иммуноглобулинов (Ig), которые связываются с разными видами антигенов в разных местах человеческого организма (например, на коже, на слизистых, в крови и т. д.). То есть антитела имеют разделение труда. Эти иммуноглобулины называются буквами латинского алфавита – A, M, G, D, E и обозначаются следующим образом – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого микроба. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM.

Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

Ферментативная реакция

Какая реакция – ферментативная? Что такое сродство, субстрат и продукт реакции?
Перейдем к рассмотрению ферментативной реакции в работе метода иммуноферментного анализа.

Что такое ферментативная реакция?

Ферментативная реакция – это химическая реакция, при которой одно вещество под действием фермента превращается в другое. Вещество, на которое действует фермент,называется субстратом. А вещество, которое получается в результате воздействия фермента, называется продуктом реакции. Причем особенность ферментативной реакции такова, что определенный фермент действует только на определенный субстрат. Такое свойство фермента узнавать «свой» субстрат называется сродством.

Таким образом, каждый фермент проводит только одну, специфичную для него реакцию. Ферментов в биологическом мире известно великое множество, равно как и ферментативных реакций. В иммуноферментной диагностике используется лишь несколько ферментативных реакций – не более 10.При этом выбирали такие ферментативные реакции, продуктом которых являются окрашенные вещества. Почему же продукты ферментативной реакции должны быть окрашенными? Потому что для вычисления концентрации вещества по окрашенному раствору существует простой химический метод – колориметрия.

Метод колориметрии – суть и принцип

Колориметрия применяет измерение плотности окраски раствора, а по плотности окраски вычисляют концентрацию вещества.При этом специальный прибор – колориметр измеряет плотность окраски раствора. В колориметрии возможны два варианта зависимости плотности окраски от концентрации вещества – это прямо пропорциональная зависимость или обратно пропорциональная зависимость. При прямо пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем интенсивнее плотность окраски раствора. При обратно пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем ниже плотность окраски раствора. Технически это происходит так: берется несколько растворов с известной концентрацией вещества, измеряется плотность этих растворов, строится график зависимости концентрации от плотности окраски (калибровочный график).

Далее измеряют плотность окраски раствора, концентрацию которого выясняют, и по калибровочному графику находят значение концентрации, соответствующее уровню измеренной плотности окраски раствора.В современных автоматических колориметрах только один раз проводят калибровку, далее аппарат сам строит калибровочную кривую, которая остается в памяти прибора, и измерение происходит автоматически.

В иммуноферментном анализе чаще всего применяются следующие ферменты: пероксидаза, щелочная фосфатаза, авидин.

Как же совмещаются иммунологическая и ферментативная реакция в иммуноферментном анализе? Сейчас мы перейдем к рассмотрению собственно иммуноферментного анализа. Какие этапы он включает и что происходит при протекании этих реакций? Иммуноферментный анализ бывает прямой и непрямой.

Прямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции.

Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом

Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15-30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену. Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы.Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4-5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном.Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.

Удаление «лишних» антител

Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой.Поскольку антитела добавляются в избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают. В результате этого все «лишние» антитела убираются, а остаются те, которые связались с антигенами, поскольку антигены «приклеены» к поверхности лунок. Лунки несколько раз ополаскивают специальным раствором, который позволяет вымыть все «лишние» антитела.

Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения

Далее начинается второй этап – ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и оставляют на 30-60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт). Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.

Именно так проходит прямой иммуноферментный анализ. Однако сегодня чаще используют непрямой иммуноферментный анализ, поскольку чувствительность и точность непрямого выше, чем прямого. Итак, перейдем к непрямому иммуноферментному анализу.

Непрямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном, а двойной контроль: связывание антител с антигеном, после чего связывание вторых антител с комплексом антитело + антиген. Как правило, антитела для первого этапа – мышиные, а для второго – козьи.

Фиксация антигенов на поверхности лунки и связывание антигена с немеченым антителом
Так же как и для прямого иммуноферментного анализа производится забор биологического материала – кровь, соскобы, мазки. Исследуемый биологический материал вносят в лунки и оставляют на 15-30 минут для приклеивания антигенов к поверхности лунок. Затем в лунки вносят немеченые антитела к антигенам и оставляют на промежуток времени (1-5 часов), чтобы антитела связались со «своими» антигенами и образовали иммунный комплекс (первый этап). После чего удаляют «лишние», не связавшиеся антитела, путем выливания содержимого лунок. Производят промывку специальным раствором для полного удаления всех не связавшихся антител.

Связывание меченого антитела с комплексом антиген + немеченое антитело
После чего берут вторые антитела – меченые, добавляют в лунки и опять оставляют на некоторое время – 15-30 минут (второй этап). За это время меченые антитела связываются с первыми – не мечеными и образуют комплекс – антитело + антитело + антиген. Однако и меченые, и не меченые антитела вносятся в лунки в избытке. Поэтому нужно опять удалить «лишние», уже меченые антитела, которые не связались с немечеными антителами. Для этого повторяют процедуру выливания содержимого лунок и промывки специальным раствором.

Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения
После чего вносят фермент, осуществляющий реакцию превращения «метки» в окрашенное вещество. Окраска развивается в течение 5-30 минут. Затем проводят колориметрию и вычисляют концентрацию окрашенного вещества. Поскольку концентрация окрашенного вещества равна концентрации меченых антител, а концентрация меченых равна концентрации немеченых антител, которая, в свою очередь равна концентрации антигена. Таким образом, получаем концентрацию выявляемого антигена.
Такой двойной контроль в виде использования двух видов антител позволил повысить чувствительность и специфичность метода иммуноферментного анализа. Несмотря на удлинение времени проведения анализа и включение дополнительных этапов, эти потери компенсируются точностью результата. Именно поэтому в настоящее время подавляющее большинство методик иммуноферментного анализа – это непрямой иммуноферментный анализ.

Какие заболевания выявляют методом иммуноферментной диагностики?

Перейдем к рассмотрению того, какие заболевания и какие биологически активные вещества выявляются методом иммуноферментного анализа. Вещества, выявляемые методом иммуноферментного анализа, представлены в таблице.

Добавить комментарий